Dalam trailer-nya, Peter Parker bertemu dengan Mr. Beck. Pertemuan ini dijembatani oleh Nick Fury secara paksa karena Peter menolak untuk berunding dengannya saat ia berencana untuk berwisata bersama teman-temannya. Beck datang dari universe lain yang terwujud oleh snap dari Tony untuk melenyapkan Thanos. Terlihat dari pakaian dan kekuatannya, Beck tidak lain adalah Quentin Beck alias Mysterio yang merupakan musuh Spiderman dalam komik.
Berbeda dengan musuh-musuh Spider-Man lain, seperti Sandman, Electro atau Doctor Octopus, Mysterio tidak memiliki kekuatan super maupun senjata canggih. Ia hanya manusia biasa. Meski begitu, Beck dianggap sebagai salah satu supervillain yang mampu membuat sang web-slinger kalang-kabut menghadapinya!
Sejak kecil, Beck menyukai dunia perfilman – utamanya special effect. Hal tersebut membuatnya mampu menciptakan ilusi yang tampak nyata, dengan menggunakan beragam peralatan serta bahan-bahan kimia. Kesal karena kerja kerasnya tidak pernah dikenal, Beck memutuskan menggunakan keahliannya untuk melakukan tindak kriminal, dan meraih ketenaran. Ia pun menjadikan Spider-Man sebagai sasaran, dengan memfitnah sang superhero sebagai pelaku serangkaian perampokan. Tapi Spidey berhasil menemukan bukti bahwa Beck, yang menamakan dirinya Mysterio, adalah dalang di balik semua itu dan mengirimnya ke penjara.
Bersumpah untuk membalas dendam, Mysterio terus melancarkan beragam plot untuk mengalahkan musuhnya. Mulai dari membuat Spider-Man kehilangan akal lewat hipnotis serta teknologi, hingga membuatnya hampir membuka identitas rahasianya; menciptakan ilusi dan set khusus sehingga Spidey menyangka tubuhnya mengecil; dan masih banyak lagi. Tidak hanya Spider-Man, Daredevil juga sempat menjadi sasarannya di mana dengan bantuan obat khusus yang mempengaruhi mood-nya, juga lewat sejumlah plot, Mysterio hampir berhasil membuat sasarannya gila. Tapi campur tangan Doctor Strange mampu mematahkan rencana jahatnya.
Mysterio pernah menemukan cara untuk memasuki Earth-1610 alias Ultimate Universe, dan berniat untuk menguasainya memakai android ciptaannya. Ketika Peter Parker mengetahui hal itu dan berusaha mencegahnya, Beck berhasil memerangkap sang superhero di sana dan memakai androidnya untuk menghabisinya, bersama dengan Spider-Man dari semesta tersebut (Miles Morales). Namun, plot terbesarnya adalah menciptakan ilusi seolah-olah dunia diserang oleh makhluk asing, membuat beragam superhero datang dan berusaha menghentikannya. Untunglah Spider-Man berhasil mengekspos ilusi sang supervillain.
